轮回肿瘤 DNA（ctDNA）通过罢了对可操作突变的非侵入性、智慧识别，透澈改变了肺癌的分子会诊。然则，由于肿瘤衰败的互异，ctDNA 分析可能具有挑战性，导致假阴性恶果。本推敲旨在字据肺癌患者的临床特征了解 ctDNA 衰败的决定成分，以便在临床扩充中安排 ctDNA 分析时更好地发挥要推敲的假阴性恶果。诊治前汇集 EGFR 突变（mEGFR）IV 期 NSCLC 患者的血液样本，并监测直至疾病进展。通过圭臬格式评估组织样本的 EGFR 情状，在基线和第一次重新评估时使用 dPCR 检测 ctDNA EGFR 情状。在疾病进展时使用 NGS 评估患者的突变情状。共收罗 40 例 mEGFR 组织样本。在开动一线诊治之前，对血浆样本进行 mEGFR 分析，65% 的患者 ctDNA 检测到 mEGFR（“衰败者”）。较高的 ECOG PS（p = 0.04）、双侧位置的原发肿瘤（p = 0.04）以及同期存在胸腔内/胸腔外疾病（p = 0.05）与 mEGFR 衰败联系。衰败者的 PFS 短于非衰败者（p = 0.03）。第一次影像学评估时 ctDNA 检测到 mEGFR 的患者 PFS 短于 ctDNA 吊销患者（p = 0.05）。咱们的初步数据标明，特定的临床特征可瞻望 NSCLC mEGFR ctDNA 衰败开云提款靠谱网站，指示对于临床扩充中了解潜在的假阴性恶果和允洽讲演具有潜在的临床适用性。
张开剩余93%推敲布景
表皮孕育因子受体（EGFR）突变利害小细胞肺癌（NSCLC）中最常见的致癌驱动突变之一，在简短 15-40% 的肺腺癌中不雅察到。在调动性 NSCLC 中不雅察到外显子 19-21 突变，包括外显子 19 缺失亚型（ex19del）和 p.L858R，越过是与年青、无抽烟史和女性性别推敲 。还是确立了三代 EGFR 酪氨酸激酶扼制剂（TKI）并引入临床扩充，用于诊治 EGFR 突变（mEGFR）肺癌，显赫改善了这些患者的临床结局。厄运的是，患者最终会出现疾病进展。在此布景下，出现了液体活检，成为癌症会诊和监测领域的一种改革性器用，可提供推敲肿瘤空间和期间异质性的实时信息，以无创、智慧的格式和快速盘活期间追踪分子改变。此外，液体活检克服了组织取样的局限性，包括侵入性和可行性，使其在早期肿瘤分子评估中的附近发生了变化。轮回肿瘤DNA（ctDNA）是指由肿瘤细胞开释并在血浆中轮回的游离DNA（cfDNA），在NSCLC中行为会诊和疾病进展时期子评估的器用。在癌症患者中发现 ctDNA 水平升高，ctDNA 衰败的增多与晚期、调动部位的数目和高肿瘤负荷联系，为了解肿瘤的异质性提供了有价值的视力，增多了新一层的预后信息。此外，在第一次重新评估时 mEGFR消灭（称为“ctDNA 吊销”）的患者比拟突变仍然存在的患者，与更好的糊口结局联系。然则，ctDNA 存在局限性和挑战，越过是由于其品貌低，取决于肿瘤的生物学和剖解学特征，这反应在衰败的高度互异上。荒谬低的 ctDNA 衰败可导致假阴性恶果。尽管引入了高智慧度的 ctDNA 分析技艺，包括下一代测序（NGS）和数字团员酶链反应（dPCR），但 ctDNA 恶果的解读在推敲和临床环境中仍然是一个环节挑战。
在这方面，为了聘请患者进行允洽的诊治并在诊治经过中监测他们，在阴性恶果的情况下，更好地了解这是真阴性还利害衰败肿瘤，是一个热烈未满足的需求。
因此，本推敲旨在通过 ctDNA 分析探讨 mEGFR NSCLC 患者临床特征与其衰败情状之间的关联，观点是真切了解个体是否衰败的可能性，幸免假阴性的繁难。
推敲要领
组织检测披露 EGFR 突变的 IV 期 NSCLC 患者，行为临床扩充的一部分，在一线诊治前（基线时）和预定的后续期间点收罗血液样本，直至疾病进展（PD）。所有患者皆接管了 EGFR-TKI 吉非替尼、阿法替尼或奥希替尼行为一线诊治。
要是基线时 ctDNA 检测到至少一种激活 mEGFR，则将患者归类为“衰败者”，要是基线时 ctDNA 未检测到 EGFR 激活突变，则将其归类为“非衰败者”。患者也被分为基线时 ctDNA 阳性、第一次重新评估时转为阴性（吊销）的患者，以及保留 mEGFR（未吊销）的患者。
基线和第一次重新评估时使用数字 PCR 进行 EGFR 突变分析。疾病进展时，使用NGS进行全面突变分析。突变等位基因的浓度讲演为等位基因分数（AF%）。
推敲恶果
基线时EGFR-cfDNA分析
本推敲纳入了组织检测披露为 IV 级 mEGFR NSCLC且为一线 EGFR-TKI 诊治候选者的患者，在诊治前从这些患者中共收罗了 40 例血液样本，并使用 dPCR 进行分析。用于会诊的组织汇集和液体活检样本之间的中位远隔为 34 天（CI 5-56）；组织和液体活检评估之间未开动诊治。表 1 总结了患者的临床特征。
表1
在基线时，40 例样本中有 26 例（65%）衰败 mEGFR ctDNA，14 例（35%）为非衰败（表 2）。发现衰败情状与 ECOG 体能情状（PS）、原发肿瘤部位以及胸腔内和/或胸腔外疾病的存在之间存在统计学显赫联系性（图 1）。较差的 ECOG PS 水平（2 和 3）（p = 0.04）、双侧位置的原发肿瘤（p = 0.04）以及同期存在胸腔内和胸腔外疾病（p = 0.05）与 mEGFR ctDNA 衰败推敲。
表2
图1
还发现衰败患者与较大肿瘤负荷（> 15 mm，中位阈值）的联系性趋势（p = 0.06）。此外，较大的疾病负荷以及同期存在胸腔内和胸腔外疾病与较高的 mEGFR AF% 联系（分裂为 p = 0.04 和 p = 0.03）（图 2A）。Logistic 回想披露衰败情状与 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤、同期存在胸腔内和胸腔外疾病、较高的肿瘤负荷、较高的 ctDNA AF% 径直联系（图 2A）。其他临床特征（会诊年纪、性别、抽烟史、原发肿瘤大小、位置和调动部位数目）与衰败情状无关。已识别的瞻望生物象征物的组合，将所有特征聚拢在沿路，导致特异性和智慧度更高的 ctDNA 衰败瞻望特征（特异性 91.7%，智慧度 61.6%，AUC 0.89）（图 2B）。
图2
衰败患者的中位 PFS 显赫短于非衰败患者（分裂为 15 个月和 30 个月；p = 0.03）（图 3A）。此外，在衰败者中，ctDNA 中 mEGFR AF% 较高（> 0.38，中位阈值）患者的 PFS 短于 AF% 较低（≤ 0.38，中位阈值）患者（分裂为 8 个月和 35 个月；p = 0.01）（图 3B）。PFS 单变量模子披露，衰败情状（HR=0.45；95% CI=0.20-0.98；p = 0.04）与 ECOG PS（HR=1.99；95% CI=1.03-3.82；p = 0.03）显赫联系（图 3D）。在多变量分析中，未证实具有统计学道理的联系性（p = 0.57）。总体而言，65% 的患者基线 ctDNA 披露为 mEGFR 衰败者，况且较高的 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤以及胸腔内/胸腔外疾病的存在与 mEGFR 衰败的发生推敲。
图3
第一次重新评估和疾病进展时EGFR-ctDNA分析
第一次评估时期析了 35 例患者的 ctDNA。16 例患者（45.7%）血浆 mEGFR 吊销，7 例患者（20%）mEGFR 捏续存在。卡方检修披露，吊销情状与联系临床特征无显赫联系性。与第一次重新评估时 ctDNA 捏续检测到突变的患者比拟，mEGFR 吊销的患者披露馅更长的 PFS（分裂为 17 个月和 7 个月；p = 0.05）（图 3C）。
对 33 例患者进行监测直至疾病进展。通过 NGS 分析这些患者的全面突变谱（表 3）。在基线 EGFR 衰败患者中，在 12 例患者中，ctDNA 检测到至少一种 EGFR 突变，在 4 例患者中，mEGFR 与其他突变共存（EGFR ex19del、TP53 p.H193Y 和 KRAS p.Q61H；EGFR ex19del 和 TP53 p.D149Y；p.L858R、MET CNV 和 EGFR CNV），在 2 例患者中发现 EGFR 之外的突变（TP53 p. I251M 和 MET p.M1131F；BRAF p.L485F），5 例患者 ctDNA 阴性。此外，在基线非衰败患者中，在 6 例患者中，疾病进展时 ctDNA 检测到至少一种 mEGFR，在 3 例患者中，mEGFR 与其他突变共存（EGFR ex19del 和 TP53 p.D100V；EGFR ex19del、EGFR p.C797S、EGFR p.D384 V、TP53 p.V113 L、MET CNV 和 EGFR CNV；EGFR p.R958H 和 TP53 p.N235H），在 1 例患者中发现 EGFR 之外的突变（CDK6 p. A326G），1 例患者保捏 ctDNA 阴性。
表3
总体而言，检测到临床和功能联系改变，包括 EGFR 突变 ex19del（31.1%）、p. C797S（17.8%）、p.T790M（13.3%）、p.L858R（15.6%）、p.L747P（2.2%），其次是 TP53 p.V113L（2.2%）、p.H193Y（2.2%）、p.D149Y（2.2%）、BRAF p.L485F（2.2%）、KRAS p.Q61H（2.2%）、MET CNV（4.5%）和 EGFR CNV（4.5%）（图 4A）。此外，5 例 ctDNA 阳性患者检出道理未明的突变，包括 EGFR p.D384V（1.7%）、EGFR p.R958H（1.7%）、CDK6 p.A326G（1.7%）、MET p.M1131F（1.7%）、TP53 p.D100V（1.7%）、TP53 p.N235D（1.7%）和 TP53 p.I251M（1.7%）（图 4B）。
图4
讨 论
液体活检干预实体瘤（包括 NSCLC）的临床扩充，在疾病会诊和 PD 时用于识别瞻望诊治有用和耐药的生物象征物，匡助临床大夫聘请诊治要领，越过是一线诊治后其法例。因此，正确领悟妥协读液体活检恶果极为环节，尤其是推敲到影响 ctDNA 衰败的生物学和临床成分，讲演假阴性恶果时。在此布景下，本推敲旨在细目与衰败情状联系的患者临床特征，以瞻望肿瘤可能是 ctDNA 衰败还利害衰败，幸免假阴性恶果的繁难。既往推敲标明，与NSCLC患者ctDNA衰败联系的临床特征包括肿瘤负荷、有丝分裂或代谢活性、组织学类型和肿瘤分级。识别与非衰败特征联系的临床成分，对于指引临床大夫了解液体活检恶果和聘请最合适的诊治要领荒谬有用。
本推敲纳入了 40 例患者，在基线时收罗血浆样本并分析 ctDNA。40 例患者中有 26 例（65%）为 mEGFR 衰败者，具有特定的临床特征，包括较高的 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤、存在胸腔内/胸腔外疾病和更差的 PFS。
EGFR 衰败与较差的临床情状联系（ECOG PS 2 和 3；p = 0.04）。先前的几项推敲还是细目了 mEGFR 肺腺癌患者 ctDNA 存在突变和/或突变数目较高、ECOG PS 水平较差和糊口期较短之间存在关联。此外，字据最近的文件，同期存在胸腔外和胸腔内疾病是 EGFR-ctDNA 衰败的临床瞻望因子（p = 0.05）。Jee 偏激共事进行的一项推敲标明，74% 的肺外疾病 NSCLC 患者ctDNA阳性，而肺内疾病患者只须 40% ctDNA阳性（p < 0.001）。此外，Passiglia 偏激共事标明，岂论使用哪种技艺，与仅胸腔内疾病患者比拟，ctDNA 检测在胸腔外疾病 mEGFR NSCLC 患者中的可靠性、高智慧度（约 80%）和准确性。
与非衰败肿瘤比拟，mEGFR 衰败率更高的NSCLC 原始肿瘤体积和直径更大。相应地，咱们的推敲标明，3 例衰败者具有双侧位置的肿瘤（p = 0.04），也发扬出较大的原发疾病体积（> 33 mm）。此外，与非衰败者（> 33 mm，n = 6 vs. ≤ 33 mm，n = 8）比拟，大大皆衰败者（> 33 mm，n = 16 vs. ≤ 33 mm，n = 10）具有较大的原发性肿瘤。然则，这种互异莫得达到统计学道理，可能是由于本推敲中的患者数目有限。此外，在咱们的部队中，还发现了较高疾病负荷与衰败情状的联系性趋势（p = 0.06），较高的 AF% 与较大的肿瘤负荷联系（p = 0.04）。事实上，天然高 AF% 指示显赫的肿瘤负荷，但据不雅察，高肿瘤负荷并不一定能瞻望 ctDNA 衰败，因为 ctDNA 也受疾病位置（内脏vs骨骼）的影响。几项推敲发现，在晚期 NSCLC 患者中，ctDNA mEGFR AF% 与较大的肿瘤负荷联系。在最近的文件中，未发现基线 EGFR 衰败情状与临床特征（包括年纪、性别以及调动部位的类型和数目）之间存在其他关联。需要强调的是，调动部位可能显赫影响 NSCLC 患者 ctDNA mEGFR 分析的准确性，即使在肿瘤负荷高的情况下亦然如斯。在咱们的部队中，大大皆同期存在胸腔外和胸腔内疾病的衰败患者发扬出庸俗的受累，包括内脏调动（如肝脏、脾脏和肾上腺），这些部位与衰败增多推敲。相背，仅存在胸腔内疾病的非衰败患者发扬出淋阿谀和骨调动，已知为 ctDNA 衰败较低部位。对于糊口率，与咱们之前在孤苦患者部队（奥希替尼行为二线诊治）中进行的计整齐致，该推敲发现非衰败患者的中位 PFS 更长，为 19.5 个月，而 EGFR 衰败患者为 3.7 个月，本推敲数据也披露，非衰败患者的 PFS 为 30 个月，衰败患者为 15 个月。Verzè 偏激共事的推敲也发现，衰败和非衰败患者的中位 PFS 存在统计学显赫互异（5 vs. 17 个月；p = 0.05）。此外，在咱们的部队中，与 mEGFR 含量较高的衰败者比拟，EGFR 突变 AF% 较低的衰败患者（AF% ≤ 0.38，阈值）披露馅更好的 PFS（p = 0.01）。与此一致，一项推敲披露，ctDNA 中 mEGFR 含量较高的患者（AF% ≥ 6.1，ROC 弧线分析生成的阈值）比拟 EGFR 突变量较低的患者，发扬出更好的 PFS（分裂为 17.8 个月和 4.3 个月；p = 0.02）和 OS（分裂为 23.6 个月和 7.7 个月；p = 0.016）。一项推敲将患者分为完好意思衰败者，界说为同期衰败激活突变和 p.T790M 突变的患者，以及仅衰败激活突变的患者，恶果披露，基线时仅衰败激活突变的患者的 PFS 存在统计学显赫互异（分裂为 5.5 个月和 1.6 个月；p = 0.01）。然则，最近的推敲讲演，在单变量模子但非多变量模子中，衰败情状和 ECOG PS 亦然 PFS 的瞻望成分。此外，与既往计整齐致，不雅察到血浆 EGFR 突变吊销的患者结局有较好的趋势（p = 0.05）。然则，莫得临床特征与吊销情状联系，可能是由于该亚组分析的患者样本量小。为了全面起见，咱们还查询了 TCGA，发现了故道理的联系性。
行为探索性谋划，咱们分析了 EGFR-TKIs 的耐药机制。在总体东说念主群中，33 例患者出现疾病进展，咱们发现这些患者险些皆（81.8%）ctDNA 至少检出一个突变，只须 6 例患者呈阴性。大大皆基线衰败者在疾病进展时 ctDNA 保留了至少一个突变（n = 18）。此外，9 例基线未衰败患者在进展时得到了至少一个荒谬的突变。耐药机制包括 EGFR 突变或触及不同通路。最近的一项推敲报说念了 14 例患者同期存在 ex19del 和 p.C797S。少数患者检测到其他临床联系变异，如 BRAF p.L485F、KRAS p.Q61H、MET CNV 和 EGFR CNV。还发现了其他道理不解的突变。其中，EGFR p.R958H 和 p.D384V 突变与胚系 EGFR 联系肺癌推敲。然则，现在未讲演这些变异的发生率。在肺癌中，低水平的 CDK6 p.A326G 与较好的预后联系，而在乳头状肾细胞癌中，MET p.M1131T 会增多激酶活性并导致表型滚动。此外，TP53 p.D100V、p.N235D 和 p.I251M 突变在胶质瘤、乳腺癌和儿童期肾上腺皮质癌中被解读为致病突变。
尽管与已发表的文件一致，本推敲细目了临床特征和衰败情状的联系性，但存在一些局限性。除了分析的样本量小外，本推敲的一个局限性是仅在 mEGFR 肿瘤患者中评估衰败。这种局限性源于通过 dPCR 评估 ctDNA 中的 EGFR 驱动突变。是以，不排斥这些患者的 ctDNA 中可能存在其他衰败突变。因此，一些咱们称为“非衰败者”的患者可能是 EGFR 之外突变“衰败者”。基线 NGS 评估将提供这些患者更全面的突变特征。然则，为了检朴资本，在临床扩充中所有患者皆进行 NGS 检测并不老是可行的，当需要以较短的盘活期间以较低的资本检测一些生物象征物（如 EGFR）时，dPCR 要领可能有所匡助。
然则，分析这组衰败患者 ctDNA EGFR 驱动突变可能提供推敲要进行的诊治的临床联系信息，EGFR 突变代表靶点。
讲演中引入的肿瘤分数（TF）参数是指 ctDNA 样本中存在的肿瘤起原的遗传物资的比例或数目，管束假阴性恶果的挑战。较高的 TF 识别具有有余 ctDNA 量的样本，指示全面的肿瘤分析，增多与组织检测的一致性。对于液体活检恶果阴性的患者，这种要领可能减少对阐明性组织检测的需要，确保实时开动诊治的信心。总之，这些数据为临床适用性提供了有价值的视力，加强了液体活检对于检测 EGFR 突变情状的环节作用，提议临床大夫和推行室东说念主员仔细推敲 ECOG PS、原发肿瘤的双侧位置以及胸腔内/胸腔外疾病的存在，以便解读阴性恶果的 ctDNA 检测。
参考文件：
Martina Ruglioni, Iacopo Petrini, Stefania Crucitta, Andrea Sbrana, Giovanna Irene Luculli, Leila Sadeghi Gol, Carola Forte, Antonio Chella, Christian Rolfo, Romano Danesi, Marzia Del Re, Clinical characteristics of EGFR-ctDNA shedders in EGFR-mutant NSCLC patients, Translational Oncology, Volume 52, 2025, 102228开云提款靠谱网站, ISSN 1936-5233, https://doi.org/10.1016/j.tranon.2024.102228.
发布于：江苏省